【貨號】 BI-WB005

【規格】 200T / 250T / 500T+1mL BSA / 2500T / 5000T /B （蛋白標準品（5mg/mL））

【保存】整套試劑室溫保存，12個(gè)月。蛋白標準溶液室溫保存，一個(gè)月；2~8℃，12個(gè)月；-20℃可長(cháng)期保存。

【產(chǎn)品組成】

【產(chǎn)品簡(jiǎn)介】

BCA蛋白定量是最常用的蛋白濃度檢測方法，其與傳統方法相比，更簡(jiǎn)單、更穩定、更靈敏度。BCA法測定蛋白濃度受其他成分影響小，對于5%以?xún)鹊腟DS、TritonX-100、Tween20、Tween80均具有很好的兼容性,但易受螯合劑、高濃度的還原劑等的影響。所以，在BCA法測定蛋白濃度前應使蛋白溶液中的EDTA濃度≤10mM，DTT濃度≤1mM，2-ME≤0.01%。

BCA蛋白定量試劑盒在50~1000μg/ml濃度范圍內有較好的線(xiàn)性關(guān)系，其最小檢出量為25μg/ml。本試劑盒僅用于科研領(lǐng)域，不宜用于臨床診斷或其他用途。

【使用方法】

1、取1ml蛋白標準配制液完全加入到含有20mg的蛋白標準(BSA)中，充分溶解，后配制成20mg/ml的蛋白標準溶液，配制后可立即使用，配制的蛋白標準溶液應-20℃保存。

2、取適量的5mg/ml蛋白標準溶液，稀釋至終濃度為500μg/ml或所需濃度。如取100μl 5mg/ml蛋白標準，加入900μl稀釋液，充分混勻，即配制成500μg/ml蛋白標準溶液。

3、根據樣品數量，按試劑(A):試劑(B)=50:1的比例配制BCA工作液，即取50份BCA試劑A和1份BCA試劑B，充分混勻，即獲得BCA工作液。例如取5mlBCA試劑A和0.1ml BCA試劑B，配制成5.1ml BCA工作液，BCA工作液室溫24h內穩定。

4、將500μg/ml蛋白標準溶液按0、1、2、4、8、12、16、20μl加到96孔板或EP管中，加稀釋液補足至20μl，其蛋白標準濃度依次為0、25、50、100、200、300、400、500μg/ml。

5、加20μl待測蛋白到96孔板或EP管中，如果樣本不足20μl，用稀釋液補足至20μl。注意：如果標準品稀釋液與溶解待測蛋白的溶液不同，應在待測蛋白中加入20μl稀釋液；如果標準品稀釋液與溶解待測蛋白樣本的溶液相同，無(wú)需在待測蛋室溫白樣本孔中加入20μl稀釋液，以減少不同溶液的差異。

6、各孔或管加入200μl配制好的BCA工作液，37℃孵育20~30min。

7、酶標儀或分光光度計測定562nm波長(cháng)處吸光度(如無(wú)562nm，540~595nm之間的波長(cháng)也可)，各孔或管吸光度減去用未加500μg/ml蛋白標準溶液的吸光度，以求得的差值為縱坐標，以標準孔或管中蛋白濃度(μg/ml)為橫坐標，得出標準曲線(xiàn)及回歸方程，根據標準曲線(xiàn)計算出待測樣品的蛋白濃度。

【注意事項】

1、如果檢測效果不佳，可以室溫放置2h或60℃放置30min，顏色會(huì )隨著(zhù)時(shí)間的延長(cháng)不斷加深。顯色反應也會(huì )隨溫度升高而加快；如果濃度較低，可以適當延長(cháng)孵育時(shí)間或在較高溫度下孵育。

2、測定標準曲線(xiàn)時(shí)發(fā)現隨著(zhù)標準品濃度的增加吸光度或顏色沒(méi)有明顯變化，可能的原因是樣品中含有嚴重干擾BCA法測定蛋白濃度的物質(zhì)。

3、BCA法檢測中樣本中不應含有EDTA，否則影響檢測結果。

4、因BCA法測定時(shí)顏色會(huì )隨著(zhù)時(shí)間的延長(cháng)不斷加深，建議每次測定時(shí)都做標準曲線(xiàn)，并且顯色反應的速度和溫度有關(guān)，所以除非精確控制顯色反應的時(shí)間和溫度，否則每次都做標準曲線(xiàn)。

5、如果沒(méi)有酶標儀，也可以使用普通分光光度計測定，但應考慮根據比色皿的最小檢測體積。應按比例適當加大BCA工作液的用量使總體積不小于最小檢測體積，樣品和標準品的用量亦相應按比例放大；使用分光光度計測定蛋白濃度時(shí)，可以測定的樣品數量可能會(huì )顯著(zhù)減少。

6、為了加快BCA法測定蛋白濃度的速度可以適當加熱，但是切勿過(guò)熱，否則易失效。

7、為保證蛋白的精確定量，樣品的提取和標準蛋白的配制最好選用相同的緩沖液，同時(shí)也要保證兩者檢測條件的一致性。如果緩沖液本身就有較高的背景值，建議使用其他的方法測定。

8、本產(chǎn)品僅限于專(zhuān)業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內。

9、為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗服并戴一次性手套操作。