【貨號】?BI-WB008

【規格】?100mL

【保存】?-20℃，12個(gè)月

【產(chǎn)品簡(jiǎn)介】

RIPA裂解液(弱，?無(wú)抑制劑)是一種常用的細胞組織快速裂解液，主要成分為50mM Tris(pH7.4)，150mM NaCl，1% NP-40，0.25% 脫氧膽酸鈉，不含蛋白酶、磷酸酯酶等抑制劑。RIPA裂解液裂解得到的蛋白樣品可以用于常規的Western、IP和ELISA等。

使用本裂解液時(shí)，用戶(hù)可以根據具體用途自行添加特定抑制劑。

【使用方法】

對于培養細胞樣品：

1、融解RIPA裂解液，混勻。取適當量的裂解液，根據需要自行確定添加適當的抑制劑或不添加抑制劑。

2、對于貼壁細胞：去除培養液，用PBS、生理鹽水或無(wú)血清培養液洗一遍。按照6孔板每孔加入150~250μL裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數下，使裂解液和細胞充分接觸。

對于懸浮細胞：離心收集細胞，用手指把細胞用力彈散。按照6孔板每孔細胞加入150~250μL裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細胞。充分裂解后應沒(méi)有明顯的細胞沉淀。如果細胞量較多，必需分裝成50~100萬(wàn)細胞/管，然后再裂解。

3、充分裂解后，10000~14000g離心3~5min，取上清，即可進(jìn)行后續的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。裂解液用量說(shuō)明：通常6孔板每孔細胞加入150μL裂解液即可，但如果細胞密度非常高可以適當加量到200μL或250μL。每100萬(wàn)細胞用100μL本產(chǎn)品裂解后獲得的上清，其蛋白濃度約為2~4mg/ml，不同細胞有所不同。

對于組織樣品：

1、把組織剪切成細小的碎片。

2、融解RIPA裂解液，混勻。取適當量的裂解液，根據需要自行確定添加適當的抑制劑或不添加抑制劑。

3、按照每20mg組織加入150~250μL裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以適當添加更多的裂解液，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當減少裂解液的用量。)

?4、用玻璃勻漿器勻漿，直至充分裂解。

5、充分裂解后，10000~14000g離心3~5min，取上清，即可進(jìn)行后續的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。每20mg凍存的小鼠肝臟組織用200μL本裂解液裂解后獲得的上清，其蛋白濃度約為15~25mg/ml，不同狀態(tài)的不同組織有所不同。

6、如果組織樣品本身非常細小，可以適當剪切后直接加入裂解液裂解，通過(guò)強烈vortex使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清，用于后續實(shí)驗。直接裂解的優(yōu)點(diǎn)是比較方便，不必使用勻漿器，缺點(diǎn)是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。

【注意事項】

1、如需添加蛋白酶抑制劑等，需自行準備。

2、裂解樣品的所有步驟都需在冰上或4℃進(jìn)行。

3、本產(chǎn)品僅限于專(zhuān)業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內。

4、為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗服并戴一次性手套操作。