【貨號】 BI-WB019

【規格】 100mL

【保存】 -20℃，12個(gè)月

【產(chǎn)品簡(jiǎn)介】

Western及IP細胞裂解液(含抑制劑)是一種常用的細胞組織快速裂解液，主要成分為20mM Tris(pH7.5)，150mM NaCl，1% Triton X-100，以及焦磷酸鈉，β-甘油磷酸鈉，EDTA，Na3VO4，亮肽素等多種抑制劑。Western及IP細胞裂解液(無(wú)抑制劑)裂解得到的蛋白樣品可以用于常規的WB，IP， co-IP。

【使用方法】

對于培養細胞樣品：

 1、融解Western及IP細胞裂解液，混勻。取適當量的裂解液，根據需要自行確定添加適當的抑制劑或不添加抑制劑。

2、對于貼壁細胞：去除培養液，用PBS、生理鹽水或無(wú)血清培養液洗一遍。按照6孔板每孔加入100~200μL裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數下，使裂解液和細胞充分接觸。通常裂解液接觸細胞1~2s后，細胞就會(huì )被裂解。

對于懸浮細胞：離心收集細胞，用手指把細胞用力彈散。按照6孔板每孔細胞加入100~200μL裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細胞。充分裂解后應沒(méi)有明顯的細胞沉淀。如果細胞量較多，必需分裝成50~100萬(wàn)細胞/管，然后再裂解。

3、充分裂解后，10000~14000g離心3~5min，取上清，即可進(jìn)行后續的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。裂解液用量說(shuō)明：通常6孔板每孔細胞加入100μL裂解液即可，但如果細胞密度非常高可以適當加量到150μL或200μL。每100萬(wàn)細胞用100μL本產(chǎn)品裂解后獲得的上清，其蛋白濃度約為2~4mg/ml，不同細胞有所不同。

對于組織樣品：

1、把組織剪切成細小的碎片。

2、融解Western及IP細胞裂解液，混勻。取適當量的裂解液，根據需要自行確定添加適當的抑制劑或不添加抑制劑。

3、按照每20mg組織加入100~200μL裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以適當添加更多的裂解液，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當減少裂解液的用量。)

4、用玻璃勻漿器勻漿，直至充分裂解。

5、充分裂解后，10000~14000g離心3~5min，取上清，即可進(jìn)行后續的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。每20mg凍存的小鼠肝臟組織用200μL本裂解液裂解后獲得的上清，其蛋白濃度約為15~25mg/ml，不同狀態(tài)的不同組織有所不同。

6、如果組織樣品本身非常細小，可以適當剪切后直接加入裂解液裂解，通過(guò)強烈渦旋使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清，用于后續實(shí)驗。直接裂解的優(yōu)點(diǎn)是比較方便，不必使用勻漿器，缺點(diǎn)是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。

【注意事項】

1、裂解樣品的所有步驟都需在冰上或4℃進(jìn)行。

2、對于某些特殊蛋白的IP，若Western及IP細胞裂解液效果不是非常理想，可以嘗試用RIPA裂解液(強、中或弱)或NP-40裂解液。如果IP的時(shí)候背景很高，則應考慮選用裂解強度較高的裂解液，例如RIPA裂解液(強或中)。如果發(fā)現目的蛋白無(wú)法被IP下來(lái)，則說(shuō)明裂解液的強度過(guò)強，可以使用較為溫和的裂解液例如RIPA裂解液 (弱)或NP-40裂解液。

3、對于某些難溶解蛋白的Western，如果發(fā)現Western及IP細胞裂解液 (P0013)效果不是非常理想，可以嘗試使用裂解強度更高的裂解液例如RIPA裂解液(強、中)或SDS裂解液。

4、本產(chǎn)品僅限于專(zhuān)業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內。

5、為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗服并戴一次性手套操作。