【貨號】 BC-C-MO-003(絨猴暫不提供鑒定報告）

【規格】 1×10⁶個(gè)/T25培養瓶（或凍存管）

【保存】 液氮保存，長(cháng)期

【產(chǎn)品介紹】

 

【收貨后處理】

1、T25培養瓶常溫運輸細胞

根據不同細胞生長(cháng)特性，分為以下處理方式：

貼壁細胞：未超過(guò)80%匯合度時(shí)，將培養瓶中的完全培養基收集至離心管中，留5mL完全培養基，放入37℃、5%CO₂孵箱培養；超過(guò)80%匯合度時(shí)，依據生長(cháng)特性進(jìn)行傳代或凍存，具體操作見(jiàn)細胞傳代和凍存步驟。首次傳代，建議1:2傳代（兩個(gè)T25）。（傳代時(shí)建議一瓶用原瓶里面的完全培養基，另外一瓶用自己配的完全培養基，進(jìn)行對比培養。） 

懸浮細胞：將T25培養瓶中的懸液收集至離心管中1000rpm離心3~5min，收集上清（后期對比培養使用），加1~2mL完全培養基重懸，按1:2比例進(jìn)行分瓶傳代（兩個(gè)T25），補充新鮮的完全培養基至4~5mL/瓶，最后放入37℃、5%CO₂細胞培養箱中培養。（傳代時(shí)建議一瓶用原瓶里面的完全培養基，另外一瓶用自己配的完全培養基，進(jìn)行對比培養。）

半貼壁、半懸浮細胞：?對于半貼壁半懸浮生長(cháng)的細胞，懸浮細胞用離心管收集細胞懸液，1000rpm離心3~5min，收集上清（后期對比培養使用）。?貼壁的細胞未超過(guò)80%匯合度時(shí)，用5mL完全培養基重懸收集到的細胞沉淀，然后加回原培養瓶中，放入37℃、5%CO₂培養箱培養。?貼壁的細胞超過(guò)80%匯合度時(shí)，根據貼壁細胞傳代方法使用0.25%胰酶消化收集；將懸浮細胞和貼壁細胞的沉淀用1~2mL完全培養基重懸收集到一起，混勻后，按1:2進(jìn)行分瓶傳代（2個(gè)T25）。（傳代時(shí)建議一瓶用原瓶里面的完全培養基，另外一瓶用自己配的完全培養基，進(jìn)行對比培養。）

2、凍存管干冰運輸細胞

將凍存管取出轉移至液氮或-80℃冰箱保存，建議盡早復蘇，具體操作見(jiàn)細胞復蘇步驟。

【復蘇培養】

從液氮中取出細胞凍存管，快速將其置入37℃水浴中解凍，直至凍存管中無(wú)結晶，然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁；將凍存管中的細胞懸液移至含1mL完全培養基的15mL離心管中，1000 rpm離心3~5min；

棄上清，用4~5mL完全培養基重懸細胞沉淀，接種至T25培養瓶，于37℃、5%CO₂細胞培養箱中培養；

第二天，換用新鮮完全培養基繼續培養，密切觀(guān)察細胞狀態(tài)。

【細胞傳代】 

細胞收集：?貼壁細胞：當細胞生長(cháng)至培養瓶或皿底面的80%以上匯合度時(shí)，棄去培養瓶或皿中的培養基，用PBS清洗細胞一次，然后添加適量的0.25%胰蛋白酶消化液至培養瓶或皿中，倒置顯微鏡下觀(guān)察，待細胞回縮變圓后，加入與胰蛋白酶消化液等量（或高于消化液的量）的完全培養基終止消化，再輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉移至15mL離心管中。?懸浮細胞：直接收集培養瓶或皿中的細胞懸浮液轉移至15mL離心管中。?半貼壁半懸浮細胞：先參考?收集懸浮細胞，再參考?收集貼壁細胞。

離心：收集好的細胞在1000rpm條件下離心3~5min，離心好后棄除上清液。

接種：根據細胞量以適量的完全培養液重懸細胞沉淀，之后按適當比例接種到新培養瓶或皿中（細胞量及培養瓶或皿的規格可按實(shí)驗要求確定）。

【細胞凍存】

細胞收集：?貼壁細胞：當細胞生長(cháng)至培養瓶或皿底面的80%以上匯合度時(shí)，棄去培養瓶或皿中的培養液，用PBS清洗細胞一次，然后添加適量的0.25%胰蛋白酶消化液至培養瓶或皿中，倒置顯微鏡下觀(guān)察，待細胞回縮變圓后，加入與胰蛋白酶消化液等量（或高于消化液的量）的完全培養液終止消化，再輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉移至15mL離心管中。?懸浮細胞：直接收集培養瓶或皿中的細胞懸浮液轉移至15mL離心管中。?半貼壁半懸浮細胞：先參考?收集懸浮細胞，再參考?收集貼壁細胞。

離心：收集好的細胞在1000rpm條件下離心3~5min，離心好后棄除上清液。

凍存液重懸：可根據細胞量（需提前計數）向沉淀細胞加入一定量的配制好的細胞凍存液（50%基礎培養基+40%胎牛血清+10%DMSO），混勻后以1mL/管加入凍存管中。

凍存：將凍存管放入裝有異丙醇的的凍存盒中進(jìn)行梯度降溫，然后放入－80℃冰箱降溫，24h后將凍存管轉入液氮罐中。(若實(shí)驗室條件不足，可于冰箱上層4℃放置30min，隨后轉移至下層-20℃冷凍2h，接下來(lái)將其放于-80℃超低溫冰箱中過(guò)夜，最終將凍存管放置于液氮中以長(cháng)期保存。

【售后依據】 

1、T25瓶細胞

收到細胞后，請及時(shí)核對培養瓶上標注的細胞名稱(chēng)是否與訂購的細胞名稱(chēng)一致以及培養瓶是否有破損或漏液等異常情況，若有異常請及時(shí)拍照聯(lián)系我們。

75%酒精棉球擦拭T25細胞培養瓶外部。

顯微鏡觀(guān)察細胞生長(cháng)情況，并對細胞進(jìn)行不同倍數拍照保存（4×，10×，20×各一張）前三天照片為重要售后依據，不提供照片默認收到狀態(tài)良好。

2、凍存細胞

收到細胞后，檢查外包裝情況、細胞名稱(chēng)是否一致和箱內是否還有干冰。如有外包裝破損或干冰已完全揮發(fā)等問(wèn)題，請及時(shí)聯(lián)系我們。

【注意事項】

1、收到細胞后，及時(shí)查看產(chǎn)品介紹，確認細胞生長(cháng)特性，并按照不同生長(cháng)特性（貼壁、懸浮、半貼壁半懸?。毎M(jìn)行處理。

2、收到細胞后建議先不要打開(kāi)培養瓶蓋，將其放入37℃培養箱中靜置3~4h后，以穩定細胞狀態(tài)。

3、有些貼壁細胞在快遞運送過(guò)程中可能會(huì )因振動(dòng)脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀(guān)察細胞的生長(cháng)密度若在60%以下，可先離心培養瓶中的完全培養基收集脫落細胞，然后加入完全培養基重懸并吹散，加回原培養瓶并補齊培養液，再放到培養箱中繼續培養。

4、如收到密閉培養瓶，處理完后放入培養箱培養時(shí)要將培養瓶蓋子擰松。

5、購買(mǎi)凍存細胞一般提供兩管，復蘇第一管如有活性狀態(tài)問(wèn)題及時(shí)與我們聯(lián)系，會(huì )有技術(shù)人員與您溝通指導后再復蘇第二管。特別說(shuō)明：未與我方聯(lián)系擅自復蘇第二管出現問(wèn)題不予售后。

6、建議在復蘇凍存細胞時(shí)，由于液氮溫度低，佩戴好防凍手套，做好防凍措施。

7、所有動(dòng)物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全柜內操作，并注意防護。所有廢液及接觸過(guò)此細胞的器皿需滅菌后方能丟棄。

8、若細胞在操作過(guò)程中發(fā)生污染，需對污染的細胞進(jìn)行滅活方可丟棄。

9、本庫的細胞系（株）僅用于科研工作，未經(jīng)許可不得用于其他目的，使用者不得將本庫細胞系（株）轉讓給第三者。