【貨號】 BC-PC-HU-001

【規格】 5*10⁵個(gè)/T25培養瓶（常溫發(fā)貨）

【保存】 液氮保存，長(cháng)期

【產(chǎn)品介紹】

 

【細胞簡(jiǎn)介】

人骨髓間充質(zhì)干細胞(BMSC)分離自骨髓；骨髓是機體的造血組織，位于身體的許多骨骼內。骨髓存在于長(cháng)骨(如肱骨、股骨)的骨髓腔和扁平骨(如髂骨)的稀松骨質(zhì)間的網(wǎng)眼中，是一種海綿狀的組織，能產(chǎn)生血細胞的骨髓略呈紅色，稱(chēng)為紅骨髓。出生時(shí)，紅骨髓充滿(mǎn)全身骨髓腔，隨著(zhù)年齡增大，脂肪細胞增多，相當部分紅骨髓被黃骨髓取代，最后幾乎只有扁平骨骨髓腔中有紅骨髓。骨髓基質(zhì)系統內存在的骨髓間充質(zhì)干細胞是一種除造血干細胞以外的、具有高度自我更新能力和多向分化潛能的干細胞，可以向骨、軟骨、肌組織、皮膚、脂肪、神經(jīng)等多種組織分化，因此可以作為組織工程中的種子細胞。在骨髓中，BMSC占骨髓有核細胞總數的0.001%~0.1%，含量極低。骨髓間充質(zhì)干細胞的體外培養條件要求較高，在培養過(guò)程中，受貼壁時(shí)間、種植密度、血清含量、培養溫度和培養基pH值等條件的影響。

【收貨后處理】

T25培養瓶常溫運輸細胞

根據不同細胞生長(cháng)特性，分為以下處理方式：

貼壁細胞：未超過(guò)80%匯合度時(shí)，將培養瓶中的完全培養基收集至離心管中，留5mL完全培養基，放入37℃、5%CO₂孵箱培養；超過(guò)80%匯合度時(shí)，依據生長(cháng)特性進(jìn)行傳代或凍存，具體操作見(jiàn)細胞傳代和凍存步驟。首次傳代，建議1:2傳代（兩個(gè)T25）。

懸浮細胞：將T25培養瓶中的懸液收集至離心管中1000rpm離心3~5min，丟棄上清，加1~2mL完全培養基重懸，按1:2比例進(jìn)行分瓶傳代（兩個(gè)T25），補充新鮮的完全培養基至4~5mL/瓶，最后放入37℃、5%CO₂細胞培養箱中培養。

半貼壁、半懸浮細胞：?對于半貼壁半懸浮生長(cháng)的細胞，懸浮細胞用離心管收集細胞懸液，1000rpm離心3~5min，丟棄上清。?貼壁的細胞未超過(guò)80%匯合度時(shí)，用5mL完全培養基重懸收集到的細胞沉淀，然后加回原培養瓶中，放入37℃、5%CO₂培養箱培養。?貼壁的細胞超過(guò)80%匯合度時(shí)，根據貼壁細胞傳代方法使用0.25%胰酶消化收集；將懸浮細胞和貼壁細胞的沉淀用1~2mL完全培養基重懸收集到一起，混勻后，按1:2進(jìn)行分瓶傳代（2個(gè)T25）。

運輸用的培養基（灌液培養基）不能再用來(lái)培養細胞，請換用按照說(shuō)明書(shū)細胞培養條件新配制的完全培養基來(lái)培養細胞。  收到細胞后第一次傳代建議T25培養瓶1：2傳代 。

【復蘇培養】

從液氮中取出細胞凍存管，快速將其置入37℃水浴中解凍，直至凍存管中無(wú)結晶，然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁；將凍存管中的細胞懸液移至含1mL完全培養基的15mL離心管中，1000 rpm離心3~5min；

棄上清，用4~5mL完全培養基重懸細胞沉淀，接種至T25培養瓶，于37℃、5%CO₂細胞培養箱中培養；

換用新鮮完全培養基繼續培養，密切觀(guān)察細胞狀態(tài)。

【細胞傳代】 

細胞收集：?貼壁細胞：當細胞生長(cháng)至培養瓶或皿底面的80%以上匯合度時(shí)，棄去培養瓶或皿中的培養基，用PBS清洗細胞一次，然后添加適量的0.25%胰蛋白酶消化液至培養瓶或皿中，倒置顯微鏡下觀(guān)察，待細胞回縮變圓后，加入與胰蛋白酶消化液等量（或高于消化液的量）的完全培養基終止消化，再輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉移至15mL離心管中。?懸浮細胞：直接收集培養瓶或皿中的細胞懸浮液轉移至15mL離心管中。?半貼壁半懸浮細胞：先參考?收集懸浮細胞，再參考?收集貼壁細胞。

離心：收集好的細胞在1000rpm條件下離心3~5min，離心好后棄除上清液。

接種：根據細胞量以適量的完全培養液重懸細胞沉淀，之后按適當比例接種到新培養瓶或皿中（細胞量及培養瓶或皿的規格可按實(shí)驗要求確定）。 

【細胞凍存】

細胞收集：?貼壁細胞：當細胞生長(cháng)至培養瓶或皿底面的80%以上匯合度時(shí)，棄去培養瓶或皿中的培養液，用PBS清洗細胞一次，然后添加適量的0.25%胰蛋白酶消化液至培養瓶或皿中，倒置顯微鏡下觀(guān)察，待細胞回縮變圓后，加入與胰蛋白酶消化液等量（或高于消化液的量）的完全培養液終止消化，再輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉移至15mL離心管中。?懸浮細胞：直接收集培養瓶或皿中的細胞懸浮液轉移至15mL離心管中。?半貼壁半懸浮細胞：先參考?收集懸浮細胞，再參考?收集貼壁細胞。

離心：收集好的細胞在1000rpm條件下離心3~5min，離心好后棄除上清液。

凍存液重懸：可根據細胞量（需提前計數）向沉淀細胞加入一定量的配制好的細胞凍存液（50%基礎培養基+40%胎牛血清+10%DMSO），混勻后以1mL/管加入凍存管中。

凍存：將凍存管放入裝有異丙醇的的凍存盒中進(jìn)行梯度降溫，然后放入-80℃冰箱降溫，24h后將凍存管轉入液氮罐中。(若實(shí)驗室條件不足，可于冰箱上層4℃放置30min，隨后轉移至下層-20℃冷凍2h，接下來(lái)將其放于-80℃超低溫冰箱中過(guò)夜，最終將凍存管放置于液氮中以長(cháng)期保存。

【售后依據】 

收到細胞后，請及時(shí)核對培養瓶上標注的細胞名稱(chēng)是否與訂購的細胞名稱(chēng)一致以及培養瓶是否有破損或漏液等異常情況，若有異常請及時(shí)拍照聯(lián)系我們。 

顯微鏡觀(guān)察細胞生長(cháng)情況，并對細胞進(jìn)行不同倍數拍照保存（4×，10×，20×各一張）前三天照片為重要售后依據，不提供照片默認收到狀態(tài)良好。

【注意事項】

1、收到細胞后，及時(shí)查看產(chǎn)品介紹，確認細胞生長(cháng)特性，并按照不同生長(cháng)特性（貼壁、懸浮、半貼壁半懸?。毎M(jìn)行處理。

2、收到細胞后建議先不要打開(kāi)培養瓶蓋，75%酒精棉球擦拭T25細胞培養瓶外部。將其放入37℃培養箱中靜置3~4h后，以穩定細胞狀態(tài)。

3、有些貼壁細胞在快遞運送過(guò)程中可能會(huì )因振動(dòng)脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀(guān)察細胞的生長(cháng)密度若在60%以下，可先離心培養瓶中的完全培養基收集脫落細胞，然后加入完全培養基重懸并吹散，加回原培養瓶并補齊培養液，再放到培養箱中繼續培養。

4、如收到密閉培養瓶，處理完后放入培養箱培養時(shí)要將培養瓶蓋子擰松。

5、所有動(dòng)物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全柜內操作，并注意防護。所有廢液及接觸過(guò)此細胞的器皿需滅菌后方能丟棄。

6、若細胞在操作過(guò)程中發(fā)生污染，需對污染的細胞進(jìn)行滅活方可丟棄。

7、本庫的細胞系（株）僅用于科研工作，未經(jīng)許可不得用于其他目的，使用者不得將本庫細胞系（株）轉讓給第三者。

【培養建議】

1、骨髓間充質(zhì)干細胞的體外培養條件要求較高，在培養過(guò)程中，受貼壁時(shí)間、種植密度、血清含量、培養溫度和培養基pH值等條件的影響。

2、人BMSC體外培養周期有限；建議使用配套的專(zhuān)用生長(cháng)培養基及正確的操作方法來(lái)培養，以此保證該細胞的最佳培養狀態(tài)。

3、該細胞可傳代10代左右，6代以?xún)葹樽罴?，建議收到細胞后盡快完成實(shí)驗。

4、注意控制胰酶消化時(shí)間，長(cháng)時(shí)間消化會(huì )影響細胞貼壁及生長(cháng)狀態(tài)。-

注：收到貨后務(wù)必三天內在4×,10×,20×倍鏡下觀(guān)察拍照留存,作為售后依據，否則默認收到貨后狀態(tài)良好。