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一、細胞概述

    RAW264.7中文全名為小鼠單核巨噬細胞白血病細胞，來(lái)源于雄性Abelson鼠科白血病病毒誘導的腫瘤，是常用的炎癥細胞模型之一，常見(jiàn)于研究細胞吞噬、細胞免疫、分子免疫學(xué)。

RAW 264.7 是一種單核細胞/巨噬細胞系，具有松散貼壁的立方形或紡錘形細胞和圓形活細胞。細胞松散附著(zhù)、堆積并變圓是正常的，尤其是在培養密集時(shí)?；罴毎梢苑蛛x和漂浮，特別是當培養物變得更加融合時(shí)。這些未附著(zhù)的細胞仍然有活力，應通過(guò)溫和離心保留下來(lái)，然后重新加入燒瓶中。不同批次血清的細微差異會(huì )導致 RAW 264.7 細胞或多或少的附著(zhù)。我們使用未經(jīng)熱滅活的優(yōu)質(zhì)血清，因為熱滅活可以減少附著(zhù)因子和生長(cháng)因子。

二、細胞培養條件

三、細胞培養建議

1、細胞復蘇：將含有1m細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5ml培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心3min，棄去上清液，補加4-6ml完全培養基吹勻。然后將細胞懸液加入培養瓶中過(guò)夜，第二天檢查細胞密度并換液。

2、細胞傳代：當細胞密度達到80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養。

2.1棄去培養液上清，用不含鈣、鎂離子的PBS(BC-BPBS-01) 潤洗細胞2次。

2.2加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-EDTA）BC-CE-005 于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2min，鏡下觀(guān)察細胞大部分圓縮并脫落，肉眼觀(guān)察細胞培養瓶上部細胞呈掛線(xiàn)狀滑落，迅速拿回操作臺，于手心輕敲幾下培養瓶，可見(jiàn)細胞呈沙粒狀滑落，加5ml以上含10%血清的完全培養基終止消化。

2.3輕輕吹打細胞，完全脫落分散后吸出，在1000RPM條件下離心3min，棄去上清液，補加1-2ml吹勻。

2.4按5-6ml/瓶補加培養液，將細胞重懸按1：2到1：4的比例分到新的培養瓶中。

3、細胞凍存

  凍存條件：20%FBS的培養基+10%DMSO（或使用細胞凍存液BC-CFM-01），2-8℃放置2小時(shí)，再將凍存管置于梯度降溫凍存盒并放于-80度過(guò)夜，第二天轉入液氮罐；