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英文名稱(chēng)：RAW 264.7

中文名稱(chēng)：小鼠單核巨噬細胞白血病細胞

種 屬：鼠源

組織來(lái)源：Abelson鼠科白血病病毒誘導的腫瘤；單核細胞；巨噬細胞。

生長(cháng)特性：貼壁生長(cháng)（胰酶會(huì )刺激分化）

細胞形態(tài)：不規則形

傳代比例：1:2 ~ 1:3

換液頻率：2~3次/周

倍增時(shí)間：12~30h

培養體系：DMEM(高糖）+10% Biochannel特級胎牛血清+1% P/S

培養條件：5%CO2 ；37℃

凍存條件：Biochannel 細胞凍存液，程序降溫，液氮長(cháng)期保存。

培養建議：

（a）在細胞生長(cháng)的初始階段，細胞以貼壁的形式生長(cháng)并呈現出長(cháng)方體的形態(tài)和有“偽足”延伸。隨著(zhù)培養時(shí)間的增加，細胞呈現圓形并以疊加的形式生長(cháng)。細胞密度達到一定的程度，會(huì )有細胞以懸浮的方式散落到到培養基中，鏡下觀(guān)察會(huì )發(fā)現懸浮和貼壁的細胞會(huì )同時(shí)出現。

（b）該細胞傳代時(shí)不需要用胰酶消化。傳代時(shí)，用無(wú)菌細胞刮刮拭培養表面將細胞刮落，收集離心后重懸接種到新的培養瓶中。

（c）該細胞形態(tài)上包含松散貼壁的紡錘形和圓形或者立方形。當細胞密度較大時(shí)，細胞會(huì )輕微脫落變圓或者許多細胞堆積在一起，有些細胞甚至脫落漂浮。這些漂浮的細胞是存活的，在傳代時(shí)應收集起來(lái)，離心后細胞沉淀可以繼續培養。

（d）血清質(zhì)量差異可能引起細胞貼壁能力變化，應選用高質(zhì)量的胎牛血清。

（e）該細胞不建議使用胰酶消化，胰酶會(huì )刺激分化； 超過(guò)3天不傳代細胞容易分化；培養時(shí)，存在少量分化細胞，屬于正?，F象。

（f）若需控制細胞的分化，RAW264.7使用吹打傳代，能更好地控制細胞分化率。

收貨事項：

（a）RAW 264.7 細胞貼壁較松，在包裝過(guò)程中切勿有劇烈的晃動(dòng)。

（b）快遞運輸路上受到顛簸，也可能會(huì )脫落。

（c）脫落的細胞懸浮在培養基中不容易聚焦 。

收到貨后把細胞放進(jìn)培養箱靜置兩個(gè)小時(shí)后觀(guān)察細胞，就可以看到了。如果靜置后看到的細胞仍偏少，請將瓶子里的培養基都轉移到離心管里，1200 rpm（約250g）離心3分鐘，即可看到沉淀的細胞。細胞全部脫落，慌亂之下可能會(huì )一個(gè)細胞都找不著(zhù)。這個(gè)時(shí)候離心驗證是最好的方法，RAW 264.7脫落后傾向于抱團，抱團時(shí)細胞是活著(zhù)的，但很難貼壁。記得一定要把聚成團的細胞吹散成單細胞，不然細胞很難重新貼壁。

常見(jiàn)問(wèn)題：

Q: 收貨時(shí)細胞出現偽足，或是碎片較多怎么辦？

A：受到運輸影響，懸浮細胞會(huì )短暫性出現形態(tài)改變的現象，如偽足等。通過(guò)傳代培養，1周左右可以恢復正常。一些細胞在運輸途中死亡而產(chǎn)生碎片，通過(guò)傳代離心可以去除。

Q：培養過(guò)程中細胞發(fā)生貼壁怎么辦？

A: 少量細胞貼壁屬于正常情況，將細胞懸液轉移至新瓶中即可。當貼壁細胞的比例高于20%，說(shuō)明細胞生長(cháng)環(huán)境有異常，需排查培養箱設置、培養基成分，以及培養器皿是否異常。

Q：培養過(guò)程中細胞發(fā)生聚團怎么辦？

A：少量細胞聚團，呈葡萄串狀，屬于正?，F象，特別是細胞密度較低時(shí)，易出現這種情況。更換血清品牌或增大血清比例（不超過(guò)20%）有助于解決聚團問(wèn)題。不建議將聚團的細胞吹散，等待密度高時(shí)，會(huì )自己分散開(kāi)。

Q：培養基里一定要加β-巰基乙醇嗎？

A：β-巰基乙醇是一種常用的培養補充劑，有抗氧化的作用，可減少氧化應激對THP-1細胞的影響。當細胞密度過(guò)大但需要維持時(shí)，可適當增加巰基乙醇的比例（不超過(guò)標準量的1.5倍）。

Q：鏡下觀(guān)察時(shí)，難以聚焦或估算密度怎么辦？

A：懸浮細胞會(huì )隨著(zhù)液體流動(dòng)，不容易聚焦，靜置5-10min使細胞沉底，之后在輕輕放上顯微鏡觀(guān)察，將有助于聚焦和估算細胞密度