文章分類(lèi)
凍存的細胞總是受損?復蘇的細胞存活率低?什么時(shí)候適合凍存細胞?復蘇細胞有什么要注意的?應對細胞復蘇問(wèn)題我們有妙招!
很多科研人會(huì )遇到細胞雖然是活細胞但是不貼壁的情況,這個(gè)情況其實(shí)很大可能就是凍存操作和復蘇操作的細節出了差錯。而要保證細胞凍存和復蘇不受傷害關(guān)鍵密寶是“慢凍快融”。
什么是“慢凍快融” 慢凍:這一步驟主要是為了防止細胞在冷凍過(guò)程中形成冰晶,從而對細胞造成損害。通過(guò)緩慢降低溫度,細胞可以逐步脫水,減少胞內冰晶的形成,從而保護細胞結構不受破壞。此外,加入低溫保護劑(如DMSO)也能提高胞膜對水的通透性,降低冰點(diǎn),延緩凍結過(guò)程,進(jìn)一步減少冰晶對細胞的損傷。 速融:在復蘇過(guò)程中,快速融化是必要的,以防止DMSO在液體狀態(tài)下對細胞的毒害作用??焖偃诨苁辜毎杆龠M(jìn)入復蘇和生長(cháng)狀態(tài),避免由于緩慢融化導致的水分滲入細胞內形成胞內再結晶,從而對細胞造成損傷。 凍存避坑指南 慢凍:這一步驟主要是為了防止細胞在冷凍過(guò)程中形成冰晶,從而對細胞造成損害。通過(guò)緩慢降低溫度,細胞可以逐步脫水,減少胞內冰晶的形成,從而保護細胞結構不受破壞。此外,加入低溫保護劑(如DMSO)也能提高胞膜對水的通透性,降低冰點(diǎn),延緩凍結過(guò)程,進(jìn)一步減少冰晶對細胞的損傷。 速融:在復蘇過(guò)程中,快速融化是必要的,以防止DMSO在液體狀態(tài)下對細胞的毒害作用??焖偃诨苁辜毎杆龠M(jìn)入復蘇和生長(cháng)狀態(tài),避免由于緩慢融化導致的水分滲入細胞內形成胞內再結晶,從而對細胞造成損傷。 復蘇操作技巧 復蘇后注意事項 細胞復蘇后只有非常少量細胞貼壁,是不是需要重新復蘇?先不要著(zhù)急丟掉!可以補加血清和細胞因子,或者每隔 2-3 天換新鮮的生長(cháng)培養基,經(jīng)過(guò) 2-3 次換液后,大部分細胞就能看到明顯增殖,此時(shí)再按照正常傳代操作即可。 細胞復蘇后剛開(kāi)始已經(jīng)貼壁了狀態(tài)不錯,后面第二天開(kāi)始出現死亡現象,這個(gè)情況可能是凍存前細胞消化過(guò)度,或者凍存中收凍存液殺害細胞凋亡導致的情況。